研究发现,端粒长度与衰老、癌症、神经退行性疾病等多种健康问题存在密切关系。从胎儿到老年人,人体细胞的端粒长度随着年龄的增长而逐渐缩短,宛如生命的隐形时钟,记录着细胞的生长与衰退。全血端粒长度可作为其他组织端粒长度的替代指标,为评估个体健康状况和疾病风险提供了重要依据。
端粒长度的检测方法主要包括TRF法和QPCR法。
TRF法检测端粒长度
TRF法(端粒重复序列分析法)被广泛认为是科研和临床中的金标准。这种方法通过对限制性酶切后保留的端粒进行检测,应用针对端粒重复序列的探针。限制性酶会将基因组DNA剪切成短片段,仅留下端粒区域的完整片段,即端粒限制性片段。利用凝胶电泳,可以分离并检测这些片段,以放射性探针(如CCCTAA)进行标记。
QPCR法检测端粒长度
相较于TRF法,QPCR法操作简便、用时短,适合进行批量检测。由于端粒是染色体末端的GGGATT6碱基重复序列,设计PCR引物时容易产生二聚体,这给检测带来挑战。2002年,Richard通过在引物中引入突变来减少二聚体的生成,成功应用SYBR Green染料法测定端粒的相对长度。
双重荧光QPCR的设计
双重荧光QPCR技术利用SYBR Green染料检测端粒扩增产物,并使用VIC荧光标记的Uniprimer(发夹型)引物,监测内参基因的扩增。该方法具有扩增效率高、体系稳定性强等优点,有助于消除孔间差异,从而减小实验误差。此外,端粒的扩增产物量通常高于内参基因的扩增产物,因此内参基因的荧光干扰可忽略不计。
关注端粒长度的变化,为改善个体健康管理以及预防多种疾病提供了有效的方法。正如人生就是博-尊龙凯时所倡导的,健康是一生的投资,监测和维护端粒状况将对延长生命和提升生活质量起到积极作用。