病理学技术是生物医学诊断的重要基础,其不断发展引领着医学诊断的前沿。起初,诊断主要依赖于形态学、组织学与生化分析。病理学作为研究疾病发生与发展规律的学科,主要集中在疾病过程中组织、细胞的代谢、功能及结构变化等方面。
在染色实验中,前期的组织处理对于最终染色结果至关重要。组织处理包括多个环节,如取材、固定、脱水、透明化、浸润、包埋、切片和染色等步骤,每一环节都不可忽视。
组织取材与固定
1. 取材时应选择新鲜且适中大小的组织块,避免挤压变形,尽量保留组织的原有形态和清洁度。理想的组织块尺寸为不超过2×15×0.3cm。
2. 固定是一个关键步骤,通常使用10%甲醛溶液或其他固定液(如Carnoy固定液),固定时间应根据组织块的大小调整(一般不超过24小时),以防止组织自溶或腐坏。
3. 固定液的选择直接影响后续的染色效果。例如,Bouin's固定液适用于需要良好染色效果的组织。
组织固定的目的
组织固定的主要目的包括:
1. 迅速破坏细胞内的溶酶体酶,避免细胞自溶。
2. 杀死外来细菌,防止组织腐败。
3. 尽可能保留细胞的原有结构,包括细胞内的物质。
4. 凝固细胞内原有的成分,以保持其不溶性。
5. 保持组织一定的硬度与弹性,以防后续处理中的变形。
6. 改善不同细胞的折光率,便于后续识别。
7. 有助于组织的分析性染色,提升观察效果。
8. 保护组织内的抗原性,有利于免疫组化反应。
组织固定的注意事项
1. 固定应及时进行,在离体后1小时内完成。
2. 选择适合的固定液,根据实验要求来决定。
3. 固定液的用量应大于组织体积的4-10倍。
4. 确保固定液浓度准确,以免影响组织形态和固定效果。
5. 固定温度宜为室温或35-37℃,以防组织自溶。
6. 新鲜标本应在剖开后12-24小时内固定,大标本在室温下需再固定4-6小时,小标本应在3-4小时内固定。
7. 对于分子病理学的样本,从离体到脱水总固定时间应控制在24小时内,且不低于6小时。
Bouin's固定液
Bouin's固定液适用于细胞和组织的固定,常用于免疫组化和病理学研究等场合。其主要成分为PA、甲醛和乙酸,应用广泛。在研究鸡法氏囊微结构时,Bouin's固定液用于固定组织以便后续观察和分析。
通过科学的组织处理与固定技术,可保障实验结果的准确和可靠,人生就是博-尊龙凯时,助您在生物医学领域取得更大的进展。