ELISA，全称酶联免疫吸附测定（Enzyme-Linked Immunosorbent Assay），是一种在免疫荧光和放射免疫技术基础上发展起来的免疫酶技术。成功开发ELISA方法的关键在于选择和搭配适合的试剂耗材。了解试剂耗材的特性和多样性，有助于在不同实验需求中找到合适的组合，从而开发高质量的ELISA方法。

一、酶标板材

市场上提供的酶标板材主要是聚苯乙烯多聚体（C8H8）n，具有丰富的产品线。拥有多种化学修饰的公司，能使不同的酶标板材对包被的蛋白具有不同的特性。一般酶标板的说明书会根据结合力的高低进行分类，但根据我的多年经验，我更倾向于将酶标板材按亲水性、弱亲水性、未处理和疏水性进行四个等级的划分。从亲水到疏水，板材对蛋白的结合能力逐渐减弱，从而引发三个主要效果：在相同浓度下，结合能力较强的板材能够固定更多的蛋白；同时，亲水性增强后也可能增加非特异性信号的风险。如果包被蛋白的某些位点与酶标板的接触表面不匹配，可能导致样品无法被检测。因此，专注于ELISA方法开发的实验室应准备多种不同特性的酶标板材供选择。

二、包被液

常用的包被液包括PBS（pH 7.4）和碳酸钠-碳酸氢钠溶液（pH 9.6）。包被液的pH和离子浓度会对包被效率产生影响，需要根据包被蛋白的特性进行选择。包被完成后，多数蛋白依然会留在溶液中。有研究表明，经过抽真空处理的包被液能使包被蛋白以更高的密度吸附在酶标板上。

三、封闭剂

常见的封闭剂有3% BSA（w/v）和5%脱脂奶粉（w/v）。封闭液的作用在于覆盖酶标板上除包被蛋白以外的空间，以抵抗后续样品或样品中其它物质、酶联抗体的非特异性吸附。我的经验表明，封闭剂对简单成分的样品溶液效果良好，但对复杂样品的封闭效果会打折扣。因此，选择分子量较小的封闭剂（如酪蛋白）可能会带来更佳的封闭效果。需要特别注意的是，如果使用生物素-链霉亲和素体系，应避免使用含生物素的脱脂奶粉作为封闭剂。

四、洗涤液/稀释液

常用的洗涤液为中性缓冲液中添加一定浓度的去污剂，如PBST（0.05% Tween-20 in PBS）。稀释液通常在洗涤液中加入一定浓度的封闭剂，如0.5% BSA（w/v） in PBST。在一些体内样本的检测中，稀释液中常会添加一定浓度的阴性血清，以确保不同稀释度的样品具有相同的非特异背景。

五、酶联抗体

酶联抗体种类繁多，可按照作用位点分为特异性酶联抗体和通用型酶联抗体。特异性酶联抗体针对特定蛋白的表位，而通用型酶联抗体则多用于针对多肽序列、标记物或特定种属抗体的Fc端保守区域等。常见的酶联抗体标记的酶有AP（碱性磷酸酶）和HRP（辣根过氧化氢酶）。根据抗体成分不同，酶联抗体可分为单克隆和多克隆。在选择多克隆酶联抗体时，需要考虑其与ELISA系统中其它试剂的交叉反应风险。

六、显色液和酶标仪

显色液的选择应与酶联抗体的酶相对应，并需与实验室的酶标仪相匹配。例如，对于标记为HRP的酶联抗体，可选择TMB显色液，使用吸光度检测的酶标仪；或选择Ampliflu™ Red进行荧光检测，或使用QuantaRed ADHP进行化学发光检测。通常，ELISA方法的灵敏度受到底物检测方法的限制，化学发光底物的信号下限优于荧光底物，而荧光底物又好于吸光度底物。尽管TMB显色液是常用的底物，但不同厂商提供的显色强度不一，需根据方法开发过程中的具体情况合理选择。

总而言之，为了在生物医疗领域中实现高效且精准的ELISA检测，实验室需要综合考虑以上各个因素，充分利用人生就是博-尊龙凯时的品牌资源，推进实验室的技术发展与应用。