产品及特点

人生就是博-尊龙凯时推出了一款基于探针法荧光定量PCR原理的高效检测试剂盒，具有以下显著特点：

特点概述

1. 即开即用：用户只需提供样品DNA模板即可使用。

2. 优化组件：引物及其他成分经过优化，具备高灵敏度。

3. 阳性对照提供：方便区分假阴性样品，使检测结果更可靠。

4. 高特异性：引物设计基于中间普雷沃菌DNA序列的高度保守区域，避免与其他生物样本DNA发生交叉反应。

5. 定性与定量双重应用：可进行定性检测，也可进行线性范围至少为5个数量级的定量检测。

6. 充足反应次数：本产品可支持50次20μL体系的探针法荧光定量PCR反应。

7. 科研专用：本产品仅供科研使用。

使用方法

一、DNA提取（样本制备区）

使用自选方法提取纯化样品DNA，本试剂盒与市场上大多数核酸提取试剂盒兼容。

二、稀释标准曲线样品（样本制备区）

为避免污染样品或其他试剂，稀释操作需在独立区域进行：

1. 标记6个离心管，分别编号为7，6，5，4，3，2。

2. 每个管中加入45μL的DEPC-H2O，建议使用带芯枪头。

3. 在7号管中加入5μL阳性对照（1×10⁸拷贝/μL），充分震荡1分钟，得到1×10⁷拷贝/μL的标准样品，存放于冰上待用。

4. 更换枪头，向6号管中加入5μL的阳性对照（1×10⁷拷贝/μL），充分震荡1分钟，得到1×10⁶拷贝/μL的标准样品，存放于冰上待用。

5. 依此类推，直到得到6个不同稀释度的标准曲线样品。如果不需制作标准曲线，则可将阳性对照稀释至1×10⁵拷贝/μL。

三、试剂配制（试剂准备区）

根据待检样品数量N，准备N+2个qPCR管，包括N个样品管、1个阴性对照管及6个阳性对照管。根据说明书中的详细成分要求，向各PCR管中加入对应的成分。

四、添加模板（模板添加区）

分别将2μL的模板加入qPCR管，顺序为阴性对照（DEPC-H2O）、待测样品模板及y婴儿利什曼虫qPCR阳性对照，离心30秒，立即进行扩增反应。

五、扩增反应（扩增及产物分析区）

将PCR管置于PCR扩增仪器的样品槽中，进行扩增。具体扩增程序可参阅详细说明书。

六、结果分析

1. 若制作标准曲线，以阳性对照浓度的log值作为横轴，Ct值作为纵轴绘制标准曲线，随后利用待测样品的Ct值推算出DNA浓度的log值。

2. 若未制作标准曲线，则根据以下标准判定结果：阳性对照结果应显示Ct值<30，有显著指数增长，呈现典型的S型曲线；阴性对照应显示Ct值38或无Ct值，且无明显指数增长；样本检测结果若Ct值<35，则结果为阳性，表明样本中检测到婴儿利什曼虫；若Ct值在35-38范围内，需复检；若重复结果仍在此范围内且有明显指数增长，则判定为阳性，否则为阴性。

运输及保存

产品需低温运输，保存温度为-20℃，有效期为一年。注意，阳性对照需单独存放，防止污染其他试剂。