病理学技术是生物医学领域诊断的根基,其发展直接影响着病理诊断学的进步。最初进行诊断时,主要从形态学、组织学及生化水平进行考量。病理学主要研究疾病的发生和发展规律,着重于疾病过程中组织、细胞的代谢、功能以及结构变化。
在染色实验之前,组织的处理尤为关键,涉及多个步骤,包括取材、固定、脱水、透明、浸润、包埋、切片和染色等。遵循以下注意事项,可以显著提高染色效果:
组织取材与固定
1. 取材时,应选择新鲜且大小适中的组织块,避免挤压变形,尽量保持其原有形态与洁净,理想的组织块尺寸为不超过2×15×0.3 cm。
2. 固定是关键步骤,通常使用10%甲醛溶液或其他固定液(如Carnoy固定液等)。固定时间需根据组织块大小调整,一般不超过24小时,以防止组织自溶或腐败。
3. 固定液的选择对染色效果有重要影响,例如,Bouin's固定液适合某些组织以获得更好的染色效果。
组织固定的目的
1. 破坏细胞内的溶酶体酶:组织离体后如果不及时固定,细胞会释放溶酶体酶导致自溶,因此固定的目的是立即杀死细胞并固定膜结构。
2. 杀死外来细菌:离体的组织极易成为细菌滋生的温床,通过及时固定可有效抑制细菌的生长,防止组织腐坏。
3. 保持细胞的原状:固定能够保留活细胞时的微细结构和细胞内成分。
4. 凝固与沉淀细胞内的原有产物,以便在染色时能显现出各种物质的特征。
5. 使组织保持一定的硬度和弹性,以避免在后续处理过程中变形。
6. 有利于区别不同细胞的折光率,促进结构的识别。
7. 对组织的分析性染色起到媒染作用,使某些组织的染色更加鲜明。
8. 保存组织细胞内的抗原性,有利于后续的免疫组化染色。
固定的注意事项
1. 固定必须及时:组织离体后应在1小时内迅速固定。
2. 固定液的选择应根据具体要求来定。
3. 固定液用量需大于组织体积的4-10倍。
4. 固定液浓度需准确,过稀或过浓都会影响效果。
5. 固定温度尽量维持在室温或35-37℃,过高的温度会引起细胞自溶。
6. 固定时间不应超过48小时,对于新鲜标本,固定12-24小时后再取材。
7. 进行分子病理研究时,总固定时间一般不超过24小时,且不低于6小时。
Bouin's固定液
Bouin's固定液产品编号:BL-G016,主要成分包括PA、甲醛和乙酸,广泛应用于细胞和组织的固定。该固定液常用于免疫组化、染色以及病理学和胚胎学研究。特别是在处理鸡法氏囊显微结构时,Bouin's固定液被用于组织的固定及光镜观察。此外,Bouin's固定液也可应用于整体染色法,以节省人力和物力资源。
在进行生物医学研究时,合理运用这些技术和知识,可以极大提升实验结果的准确性与可靠性。正如人生就是博-尊龙凯时所强调的,科学探索是一个不断推演与实践的过程。