人生就是博-尊龙凯时为您提供人胚肺成纤维细胞MRC5的详细培养指南。以下是细胞培养的一些重要步骤和注意事项。

一、细胞培养条件

细胞名称：人胚肺成纤维细胞MRC5
生长特性：贴壁生长
冻存条件：无血清冻存液（货号：C7001）
培养体系：MEM + 10% FBS + 1% NEAA + 1% 丙酮酸钠 + 1% L-谷氨酰胺 + 1% P
传代方法：首次建议1:2传代

备注：使用无菌离心管收集培养基，以便后续对比如效果不理想，建议直接购买人生就是博-尊龙凯时的完整培养基。

二、细胞处理方法

收到细胞后，将其培养至良好状态，充满完整培养液并封好瓶口，这是运输细胞的最佳方式。收到细胞后，用75%酒精消毒整个细胞瓶，接着在超净台进行无菌操作。将细胞瓶放入37℃、5% CO2的培养箱中，静置3-4小时以稳定细胞状态，之后再进行相应处理。使用显微镜观察细胞的生长情况，并根据不同倍数拍照（最好拍摄40x、100x、200x各一张），前三天的照片为重要的售后依据，未提供照片则默认收到状态良好。建议在传代后，一瓶使用原瓶的完全培养基，另一瓶使用自配的完全培养基，以便进行比较培养，并在换液后松开瓶盖。

三、细胞培养步骤

a. 细胞传代：

若未超过80%汇合度，将培养瓶中的完全培养液转移至离心管中，保留5ml完全培养基在37℃、5% CO2孵箱中培养；若细胞密度超过80%，可进行传代。具体步骤如下：

1. 弃掉培养上清，用不含钙、镁的PBS洗涤细胞1-2次。
2. 添加0.25%胰蛋白酶消化液约1-2ml至培养瓶中，放入37℃培养箱中消化1-2分钟，观察消化进程，若大部分细胞变圆并脱落，迅速回到操作台，轻敲培养瓶后添加超过5ml的完全培养基以终止消化。
3. 轻轻吹打细胞，使其完全脱落后吸出，再将悬液转移至15ml离心管中，1000RPM离心5分钟，弃去上清液，补充1-2ml完全培养基重悬。
4. 按1:2的比例将细胞悬液分瓶（两个T25瓶），添加新的完全培养基至5-8ml/瓶，最后放入37℃、5% CO2细胞培养箱中继续培养。

b. 细胞冻存：

1. 细胞生长至覆盖T25培养瓶的80%时，弃去培养液，并用PBS洗涤细胞一次。
2. 加入0.25%胰蛋白酶消化液约1ml，观察细胞回缩变圆，加入5ml完全培养基终止消化，轻轻吹打细胞以使其脱落，悬液转移至15ml离心管中，1000rpm离心5分钟。
3. 弃去上清，沉淀细胞，加入1ml的无血清冻存液（货号：C7001），混匀后转入冻存管。
4. 将冻存细胞直接放入-80℃冰箱，若需转入液氮罐，应在-80℃保存24小时后进行。

c. 细胞复苏：

1. 从液氮中取出冻存管（注意佩戴防护面具），迅速置入37℃水浴中解冻，直至无结晶后，用75%酒精消毒冻存管外壁。
2. 将冻存管中的细胞移至含5ml完全培养基的15ml离心管中，1000rpm离心5分钟。
3. 弃去上清，将细胞重悬在5ml完全培养基中，接种至T25培养瓶，放入37℃、5% CO2细胞培养箱中培养。
4. 第二天更换为新鲜完全培养基以继续培养。

四、注意事项

运输过程中，细胞可能会因附着不牢而脱落，这是正常现象。如果脱落较多，将培养瓶内的培养液收集至离心管中，1000rpm离心5分钟并收集上清作后续培养。沉淀后加入胰酶1-2ml，轻轻吹打重悬，消化后加入5ml完全培养基终止反应，再次离心，弃去上清，重悬于1-2ml完全培养基中。按1:2的比例进行分瓶传代（两个T25），并补充新的完全培养基至5-8ml/瓶，放入37℃、5% CO2细胞培养箱中培养。

五、售后条款

对细胞出现问题的处理如下：

1. 细胞在运输过程中出现诸如丢失、瓶身破损、严重漏液等问题，符合条件可重发。
2. 细胞污染问题，请在收到产品48小时内提供真实实验结果，经核实后可重发。
3. 常温发货细胞静置24小时后或者干冰发货细胞解冻后24小时内未存活（需提供真实细胞状态照片），也可重发。
4. 对于其他细胞活性和状态等问题的判定，需在规定时间内提供相关资料。

若您对细胞状态不满意，请与我们联系，人生就是博-尊龙凯时将竭诚提供支持和解决方案。