人恶性黑色素瘤细胞SK-MEL-2培养协议

一、细胞培养条件

细胞名称：人恶性黑色素瘤细胞SK-MEL-2

生长特性：贴壁生长

冻存条件：无血清冻存液（货号：C7001）

培养体系：1640培养基 + 10%胎牛血清 + 1%双抗

传代方法：首次建议1:2传代；传代情况为2天换液。

备注：使用无菌离心管收集培养基，作为过渡对比培养。如果对比培养效果不良，建议直接购买我们的完全培养基，人生就是博-尊龙凯时提供优质产品确保实验成功。

二、细胞收到后处理

将细胞培养至良好状态后，灌满完全培养液并封好瓶口是运输细胞的最佳方式。收到细胞后，使用75%酒精喷洒整个细胞瓶进行消毒，随后置于超净台中进行严格无菌操作。将细胞瓶放入37℃、5%CO2的培养箱中静置3-4小时，以稳定细胞状态后再进行后续处理。显微镜下观察细胞生长情况，并根据不同倍数拍照保存（推荐拍摄40x、100x及200x各一张）。前三天的照片将成为重要售后依据，若不提供照片，则默认细胞状态良好。

三、细胞培养步骤

a. 细胞传代

若细胞未超过80%汇合度，将培养液收集至离心管中，留5ml完全培养基，放回37℃、5%CO2的孵箱培养。若细胞密度超过80%，则可进行传代，具体步骤如下：

1. 弃去培养上清，用不含钙镁离子的PBS洗涤细胞1-2次。
2. 添加0.25%胰蛋白酶消化液约1-2ml至培养瓶中，置于37℃培养箱中消化1-2分钟，然后观察细胞消化情况，若细胞大部分变圆并脱落，迅速将瓶子取回，轻敲后加入5ml以上完全培养基以终止消化。
3. 轻轻吹打细胞使其完全脱落后吸出，将悬液转移至15ml离心管中，在1000RPM条件下离心5分钟，弃去上清液，补充1-2ml完全培养基重悬。
4. 将细胞悬液按1:2比例进行分瓶传代（两个T25瓶），补充新的完全培养基至5-8ml/瓶，最后放入37℃、5%CO2细胞培养箱培养。

b. 细胞冻存

1. 当细胞生长至覆盖培养瓶80%面积时，弃去T25培养瓶中的培养液，用PBS清洗细胞一次。
2. 添加0.25%胰蛋白酶消化液约1ml，观察细胞回缩变圆后加入5ml完全培养基终止消化，轻轻吹打细胞使其脱落，将悬液转移至15ml离心管中，1000rpm离心5分钟。
3. 弃上清后，将细胞沉淀与1ml无血清冻存液（货号：C7001）混匀后加入冻存管中。
4. 将冻存细胞直接放入-80℃冰箱，如需转入液氮罐，需在-80℃冰箱中存放24小时以上再转入液氮罐中。

c. 细胞复苏

1. 从液氮中取出细胞冻存管，快速置于37℃水浴解冻，至冻存管中无结晶后，使用75%酒精擦拭冻存管外壁。
2. 将冻存管中的细胞移至含5ml完全培养基的15ml离心管中，1000rpm离心5分钟。
3. 弃上清后，用5ml完全培养基重悬细胞，接种至T25培养瓶，置于37℃、5%CO2细胞培养箱中培养。
4. 第二天更换新鲜完全培养基继续培养。

四、注意事项

部分细胞可能会在运输过程中发生脱落，属正常现象。可按照如下方法处理：收集培养瓶中的所有培养液至离心管，1000rpm离心5分钟，收集上清作为过渡培养（后期对比培养）。沉淀后加入胰酶1-2ml，轻轻吹打，重悬，消化1-2分钟后添加5ml完全培养基终止反应。再进行离心，弃上清，加1-2ml完全培养基重悬，并按1:2比例进行分瓶传代（两个T25瓶），补充新的完全培养基至5-8ml/瓶，最后放入37℃、5%CO2细胞培养箱进行培养。

五、售后条款

1）细胞出现问题的重发情况及判定标准：

1. 细胞运输途中问题（如细胞丢失、瓶身破损、培养液漏液等）属于重发范围。
2. 细胞污染问题须在收到产品48小时内提供真实实验结果，通过核实后重发。
3. 常温发货细胞静置24小时后或干冰运输细胞解冻后24小时仍未存活（需提供真实清晰细胞状态照片），可申请重发。
4. 干冰发货细胞复苏后如出现污染，可申请重发。
5. 细胞活性问题需在收到商品7天内提供真实实验结果，采用台盼蓝染色法评估细胞活力，核实后予以重发。
6. 收到细胞当天及第2、3天须拍照，3天内未告知将视为符合标准。

如4-7天内出现问题且提供前三天照片与操作详细步骤，技术人员判定为我方责任的，予以重发。若为双方责任，则按合同价的50%收费重发。

2）细胞出现问题的不予重发情况：

1. 客户造成的细胞污染，不予重发。
2. 不当操作导致细胞状态不佳的，不予重发。
3. 使用非推荐培养体系导致细胞状态不佳的，不予重发。
4. 未提供细胞培养前三天照片且细胞状态不佳的，不予重发。
5. 细胞培养过程中的额外处理，不予重发。
6. 收到细胞2天内未反馈的，不予重发。
7. 具体情况需依据个案判定。

选择人生就是博-尊龙凯时，为您的实验提供优质细胞和服务，助力科研事业。