细胞株是通过单细胞分离培养或筛选方法而得到的一组细胞，其特殊性质或标志需要在整个培养过程中保持一致。然而，在体外培养细胞株时，常常会遇到以下问题。

一、细胞株无法在培养器皿上贴壁生长

1. 胰酶消化过度：建议缩短胰酶消化时间或减少胰酶用量。
2. 支原体污染：应隔离细胞株并检测是否存在感染。在此情况下，清洗通风厨和培养箱，并在灭菌处理后丢弃受污染的细胞株。
3. 培养基中缺乏附着因子：确保所用无血清配方中含有附着因子，或使用经过特殊处理的培养板。

二、细胞株生长缓慢

1. 培养基或血清的变化：比较不同培养基中的成分，如葡萄糖和氨基酸，确保没有影响细胞生长的差异。增加细胞株初始接种密度，以帮助细胞适应新的培养基。
2. 生长促进成分耗竭：更换新鲜培养基，并向其中添加所需的生长促进成分，如L-谷氨酰胺。
3. 轻微的细菌或真菌污染：在无抗生素的条件下培养，如果细胞被污染，需进行灭菌处理后丢弃。
4. 储存不当：血清需在-5℃至-20℃下储存，培养基应在2℃~8℃下避光储存，尽量减少其暴露在光下的时间。
5. 初始接种密度低：需要增大活细胞的接种密度以促进生长。
6. 细胞株老化：丢弃老化的细胞，使用代数较少的细胞。
7. 支原体污染：同样需隔离细胞株，并进行相应的检测。

三、培养基pH值变化迅速

1. 培养箱CO2分压设置错误：根据培养基中NaHCO3的浓度调整CO2分压。
2. 培养瓶盖过紧：放松瓶盖，旋松约1/4圈。
3. 缓冲系统不足：添加HEPES缓冲液，使其终浓度在10-25mM。
4. 盐含量不准确：在CO2平衡环境中，使用以Earle平衡盐为基础的培养基。

四、细胞株凋亡

1. 培养箱中缺乏CO2：监测CO2使用速度，定期检查管路连接处是否漏气，避免频繁开启培养箱门。
2. 培养箱内温度波动：定期监测温度并做出相应的校正。
3. 抗生素毒性浓度：减少抗生素的用量，尤其在使用无血清培养基时，需降低抗生素浓度。
4. 细胞冻存或复苏过程中的损伤：应使用新的细胞进行实验。
5. 培养基渗透压不适：检查并调整培养基的渗透压，确保在适合范围内。
6. 废物代谢产物积累：需要更换新鲜培养基。

五、悬浮细胞株团聚

1. 存在钙离子和镁离子：使用不含钙离子和镁离子的平衡盐溶液清洗细胞，轻轻吹打细胞形成单细胞悬液。
2. 支原体污染：进行隔离检测，清洗通风厨和培养箱，受污染的细胞需灭菌处理后丢弃。
3. 蛋白水解酶消化过度：可用0.0001%DNA酶I处理细胞，随后用PBS冲洗再接种到新培养基中。

通过以上对细胞株在培养过程中可能遇到的问题、原因及解决方法的分析，希望对您在细胞培养中遇到的困难有所帮助。敬请关注人生就是博-尊龙凯时带来的更多生物医疗相关内容。